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蛋白平台│设备篇(三):相互作用分析

浏览次数:875次 发布时间:2016-06-29 【关闭】 字体:   

一、Biacore T200 相互作用仪

 

1)分析物以恒定流速和浓度流过芯片表面;

2)与固定在芯片表面上的另一生物分子(称为:配体)发生相互作用;使芯片表面物质质量发生改变,引起折射率改变;

3)仪器记录下响应值(response,RU)的改变;

4)进样结束后,切换缓冲液流过芯片表面,分析物由配体上自发解离,解离的进程由响应值实时监控。

相互作用过程演示

二、ITC200 等温滴定量热仪

二、ITC200 等温滴定量热仪

基于等温滴定量热技术(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)

测定生物分子反应热,同时确定结合/解离平衡常数、反应化学量(n)、焓(ΔH)和熵(ΔS),以阐明分子相互作用的机制

                                                     ITC相互作用原理

1)微量热仪中有两个池,其中一个含有水,作为参比池,另一个含有样品。参比池和样品池被设定到所需的实验温度。


2)将装有配体分子的滴定针插入包含目标蛋白的样品池中并逐渐滴定注入;


3)当有配体与蛋白质结合,则可检测到被吸收或是被释放的热量变化;


4)每一次滴定时,量热仪测量被释放或吸收的所有热量,直到结合反应达到平衡。  测得的热量与结合量成正比。

三、相互作用分析比较

 

 

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